大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備經(jīng)驗之談

      細(xì)菌處于容易接受外源DNA的狀態(tài)稱之為感受態(tài)，通過物理或化學(xué)的方法，人工誘導(dǎo)細(xì)菌細(xì)胞成為敏感的感受態(tài)細(xì)胞是重組DNA轉(zhuǎn)化細(xì)菌技術(shù)的關(guān)鍵。制備出感受態(tài)細(xì)胞，我們就可以方便的將需要克隆的質(zhì)粒導(dǎo)入其中，使其繁殖，從而獲得大量的質(zhì)粒。CaCl₂轉(zhuǎn)化法是常用的感受態(tài)細(xì)胞制備方法，其制備流程簡單，快捷，成本低，并且能夠滿足普通的轉(zhuǎn)化和克隆的需求。

      判斷感受態(tài)細(xì)胞制備的優(yōu)劣主要是通過轉(zhuǎn)化效率來檢測。經(jīng)轉(zhuǎn)化外源質(zhì)粒DNA的大腸桿菌在含抗性的LB平板過夜培養(yǎng)后，平板上長滿克隆且陰性對照（未轉(zhuǎn)入外源DNA的感受態(tài)）沒有克隆，證明感受態(tài)細(xì)胞制備良好。

注意事項：

1、在制備感受態(tài)細(xì)胞過程中，所有用到的耗材，試劑均要求無菌，操作過程也要求*按照無菌操作進行，避免雜菌及污染。

2、制備感受態(tài)的菌株最好是先將甘油菌劃線于無抗性的LB平板中進行活化，然后挑選單克隆的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)。如果甘油菌溶解后直接在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)來制備感受態(tài)，會影響感受態(tài)細(xì)胞的活性。

3、在制備感受態(tài)細(xì)胞的過程中，保持各環(huán)節(jié)處于低溫環(huán)境，4℃離心，冰上重懸，CaCl₂溶液置于冰浴中，以保證感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

4、重懸細(xì)胞時，盡量避免吹打細(xì)胞造成細(xì)胞損傷，通過輕輕震蕩使細(xì)胞重懸，減少對菌株的損傷從而影響其活性。

5、制備好的感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)盡快使用，存放過久會影響其轉(zhuǎn)化效率。

6、感受態(tài)細(xì)胞不宜反復(fù)凍融，因為凍融過程中產(chǎn)生的冰晶會對細(xì)菌細(xì)胞造成傷害。

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