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厭氧菌的幾種培養(yǎng)方法

日期:2025-02-27瀏覽:1734次

厭氧菌的幾種培養(yǎng)方法


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厭氧菌在有氧環(huán)境中無法生長,因此需要無氧環(huán)境。為了創(chuàng)造這種環(huán)境,通常會在培養(yǎng)基中加入還原劑,或者通過物理和化學(xué)方法去除環(huán)境中的游離氧,以降低氧化還原電勢。以下是幾種常見的厭氧菌培養(yǎng)方法:
皰肉培養(yǎng)基法 
這是簡單的厭氧培養(yǎng)方法之一,不需要特殊設(shè)備。將皰肉和肉湯裝入大試管中,液面用凡士林封閉,從而創(chuàng)造無氧環(huán)境。使用前,將裝有培養(yǎng)基的試管放入沸水浴中加熱10-20分鐘,以釋放溶解氧。
厭氧罐法 
這是一種應(yīng)用廣泛的方法,通過物理化學(xué)法在罐內(nèi)創(chuàng)造厭氧環(huán)境。厭氧罐法分為兩種:
抽氣換氣法 
適用于一般實驗室,經(jīng)濟實惠且能迅速建立厭氧環(huán)境。標(biāo)本接種后,將平板放入?yún)捬豕拗校瑪Q緊蓋子,用真空泵抽出罐中空氣,使壓力真空表至-79.98KPa。停止抽氣后,充入高純氮氣使壓力真空表指針回0位。連續(xù)反復(fù)3次,在罐內(nèi)-79.98KPa情況下,充入70%N2、20%H2、10%CO2(或20%CO2、80%H2)。罐中放入冷催化劑鈀粒,催化罐中殘余O2和H2化合成水。罐中放美藍(lán)指示管,有氧呈藍(lán)色,無氧紅色。臨用前將美藍(lán)煮沸使變無色,放入罐中先呈淺藍(lán)色,待罐中無氧環(huán)境形成,美藍(lán)即持續(xù)無色。
氣體發(fā)生袋法 
袋由錫箔密封,含有兩種藥片,枸椽酸和重碳酸氫鈉,另一種含有硼氫藥片。前者遇水放出二氧化碳,后者可釋放氫。使用時在袋右上角剪一小口,灌進(jìn)10mL蒸餾水,立即放入含有鈀粒、指示劑及平板培養(yǎng)基的厭氧罐中,擰緊蓋2-3分鐘蓋子微熱并少量水蒸氣出現(xiàn)。密封1小時左右罐中O2含量可低于1%。
厭氧袋法 
即在塑料袋內(nèi)創(chuàng)造厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌。該方法適用于實驗室或外出采樣、現(xiàn)場接種等。原理與氣體發(fā)生袋法相同,只是采用塑料袋代替了厭氧罐。氣袋為一透明而密閉的塑料袋,內(nèi)裝有氣體發(fā)生管(有硼氫的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿)、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。首先將接種的平板培養(yǎng)基放入袋中,擠出袋內(nèi)空氣,然后密封袋口。先折斷氣體發(fā)生管,20分鐘后再折斷美蘭指示劑管,如果指示劑不變藍(lán)色,說明袋內(nèi)達(dá)厭氧狀態(tài),即可放入37℃進(jìn)行培養(yǎng)。
厭氧手套箱法 
這是一整套系統(tǒng),是最佳厭氧菌培養(yǎng)方法,通常用于厭氧細(xì)菌的大量培養(yǎng)研究。厭氧手套箱是一個密閉的大型箱,前部是有機玻璃面板,板上裝有兩個手套,可通過手套在箱內(nèi)操作。厭氧手套箱可調(diào)節(jié)溫度,本身是孵育箱或孵育箱即附在內(nèi),還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌落。使用時應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程,保證箱內(nèi)氣體比例合理。


厭氧菌培養(yǎng)常用氣體及作用介紹:


1. 氫氣

氫氣是厭氧培養(yǎng)箱中常用的氣體之一。它可以束縛氧氣,創(chuàng)造無氧條件。同時,氫氣還可促進(jìn)細(xì)菌進(jìn)行呼吸代謝,使其更適應(yīng)于厭氧環(huán)境。需要注意的是,氫氣是易燃易爆的氣體,所以在使用時一定要注意安全。

2. 二氧化碳

二氧化碳在厭氧培養(yǎng)箱中也是常用的氣體之一。它可以調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的pH值和緩沖作用,提供相對穩(wěn)定的環(huán)境。此外,二氧化碳還與氫氣相互作用,形成二氧化碳?xì)夥眨M(jìn)一步保證厭氧生長環(huán)境。

3. 氮氣

氮氣在厭氧條件下不會引入氧氣,使得細(xì)菌可以在消耗體外溶氧之后繼續(xù)生長。此外,氮氣通過對壓力進(jìn)行調(diào)節(jié),負(fù)責(zé)維持厭氧培養(yǎng)箱中的壓力范圍。

  注意事項


1. 氣體的純度必須得到保證,否則細(xì)菌不僅不能正常生長,還可能受到有害物質(zhì)的影響。

2. 氣體的使用量、比例和時間等參數(shù)必須嚴(yán)格控制,以免對生長環(huán)境產(chǎn)生負(fù)面影響。

3. 氣體的供應(yīng)管路必須檢查是否暢通,以保證氣體可控。

4. 在使用氫氣時,必須注意安全。使用前應(yīng)進(jìn)行漏氣檢測,并嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。

5. 在操作過程中需要注意無菌技術(shù),以免細(xì)菌污染。



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